HPLC法测定苦参碱含量
苦参碱含量的HPLC测定法
本文采用HPLC法建立了苦参中苦参碱含量的检测方法。实验采用氨基色谱柱，以乙腈+磷酸二氢钠（80+20）为流动相，检测波长210nm，流速1ml/min，苦参碱在0.01~0.2μg范围内具有良好线性范围（R2=0.9991），RSD为0.45%（n=5）。采用HPLC法检测苦参碱简单、快速、准确，可用于质量控制。
苦参碱是豆科植物苦参干燥根的主要成分之一，其在中枢神经系统、心血管系统、杀虫抗菌、抗炎、免疫及抗肿瘤等方面有重要的药理活性。本文采用HPLC法对苦参中的苦参碱进行含量测定，方法简单快速，适用于对苦参药材的质量控制。
仪器与试剂
仪器
LabTech LC600二元梯度高效液相色谱系统
试剂
乙腈（色谱级）；磷酸二氢钠（分析纯）；去离子水；苦参碱标样：已知含量99%。
实验方法
提取方法
取苦参浸膏0.15g，加入碱性甲醇（氨水调甲醇pH值到9）5ml超声提取30min，离心取上清液。再分别加入碱性甲醇2ml，超声提取两次，离心后合并提取液，过滤，用碱性甲醇定容至10ml，提取液待用。
液相色谱条件
色谱柱：氨基柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：乙腈+磷酸二氢钠（0.02mol/L）=80+20(V/V)；流速：1ml/min；进样量：20μl；紫外检测器：210nm；柱温：30℃。
标准溶液的配置
称取苦参碱标准品0.05g（精确至0.0002g）,置于50ml容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。用流动相乙腈+磷酸二氢钠（0.02mol/L）=80+20（V/V）稀释浓度为0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml标准液，摇匀备用。
试样溶液的配置
称取约0.02g苦参的提取液，置于50ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。经0.45μm的针筒式微孔过滤膜过滤，滤液作为试样待进行液相色谱测定。
结果
苦参碱标准品色谱图如图1所示。
苦参碱标准品标准曲线的制备：配置不同浓度标准品进HPLC检测，绘制标准曲线，见图2。标准品浓度分别为：0.5μg/ml、1μg/ml、2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml。按色谱条件测定，以峰面积对不同浓度进行回归，得到回归方程为Y=-1.056×104+3.027×104X，R2=0.9991。峰面积与苦参碱浓度呈良好的线性关系。
苦参碱试样色谱图见图3，苦参碱试样5次重复进样，见表1。经计算，稀释试样中苦参碱的平均浓度为1.163μg/ml，见表1，重复性RSD为0.45%。计算得苦参提取液中苦参碱的浓度为2.717mg/g。
小结
本文采用HPLC法对苦参中的苦参碱进行含量测定，前处理方法简单，苦参碱在0.01~0.2μg范围内具有良好的线性范围，回归方程为Y=-1.056×104+3.027×104X，R2=0.9991，重复性良好，RSD=0.45%（n=5），苦参提取液浓度为2.717mg/g。HPLC法对苦参碱含量测定的方法准确、快速，可有效应用于苦参药材的质量控制。
莱伯泰科仪器有限公司
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